Browsing by Subject "neutralization"

Nopeat ja luotettavat testit neutraloivien vasta-aineiden tunnistamiseen olisivat hyödyksi suojaavan immuni-teetin määrittämisessä ja hyvin lähisukuisten taudinaiheuttajien aikaansaamien tartuntatautien serologisessa erottamisessa toisistaan. Olemme aiemmin kehittäneet aikaerotteiseen Försterin resonanssienergiansiirtoon (TR-FRET) perustuvia nopeita immuunimäärityksiä ja osoittaneet niiden toimivan erinomaisen hyvin myyrä-kuumeen diagnostiikassa. Pidimme mahdollisena, että näitä TR-FRET-immuunimääritysmenetelmiä voitaisiin käyttää myös neutraloivien vasta-aineiden tunnistamiseen. Selvittääksemme tämän Puumala-virusta hyväksi käyttäen pystytimme kaksi TR-FRETiin perustuvaa määritysmenetelmää vasta-aineille, jotka tunnistavat kyseisen viruksen ulkorakenteeseen kuuluvan Gn-glykoproteiinin ektodomeenin (GnE): GnE-CFRET (kompeti-tiivinen FRET-immunomääritys) ja GnE-LFRET (proteiini L:ään perustuva FRET-immunomääritys). Analy-soimme näillä menetelmillä 42 seeruminäytettä, mukaan lukien 28 näytettä aiemmin myyräkuumeen sairas-taneilta potilailta, ja määritimme vastaavat neutralisaatiotiitterit pFRNT-menetelmällä (pseudotype focus re-duction neutralization test). GnE-LFRET–signaalin ja neutralisaatiotiitterin välillä oli selkeä korrelaatio mene-telmän tunnistaessa vahvasti neutraloivat näytteet suurella herkkyydellä ja tarkkuudella. Myös GnE-CFRET tunnisti vahvasti neutraloivat näytteet tarkasti, joskaan ei ollut yhtä herkkä. Jatkossa neutraloivien vasta-aineiden tunnistusta TR-FRET–menetelmillä voidaan kehittää käyttämällä useampia eri leimattuja neutra-loivia vasta-aineita ja useampia eri leimattuja antigeenejä. Ihanteellisesti leimattuna antigeeninä voitaisiin käyttää kokonaista glykoproteiinipiikkikompleksia tai viruksen kaltaista partikkelia (VLP). Yhteenvetona TR-FRET-immuunimääritykset vaikuttavat lupaavilta neutraloivien vasta-aineiden tunnistuksessa, mutta lisää kehitystyötä tarvitaan ennen kuin tämä uusi lähestymistapa on valmis kenttäkäyttöön.

Coronavirus disease 2019 (COVID-19) is still considered a global pandemic with novel immunoevasive variants constituting a potential threat to life for many susceptible individuals. Despite successful vaccination programmes, which ensued in early 2020, spread of the virus is still an unresolved issue. To address this, innovative prophylactic approaches are being continuously investigated to target the causative agent of COVID-19, severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Prevention of infection primarily focuses on the targeting of the receptor-binding domain (RBD) on the spike protein of SARS-CoV-2, which is used to infect host cells presenting angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) on their surface. In 2023, a novel antibody mimetic targeting scaffold, namely the sherpabody platform (SH3; src-homology 3; Recombinant Protein Affinity), was introduced. Accordingly, an intranasally administered, RBD targeting trimeric sherpabody, TriSb92, was demonstrated to prevent infection by SARS-CoV-2 and its recent variants of concern by targeting a conserved region within the spike RBD in vitro and in vivo. This study was performed to further investigate and develop the use of sherpabodies in SARS-CoV-2 prophylaxis. Various homo- and heteromultimeric constructs were assembled and the efficiency of their bacterial production was assessed. Additionally, their functionality, specificity and avidity was analysed. Specifically, the combination of different functionalities within a single molecule – receptor blocking and fusion prevention – was studied. Newly discovered RBD-targeting sherpabodies assembled into multimers were able to neutralize SARS-CoV-2 variants, including the latest Omicron subvariants BA.2.75.2 and XBB.1.5. These multimeric sherpabodies were shown to be easily manufacturable, highly target-specific and multifunctional when desired, making them excellent candidates for intranasally administered SARS-CoV-2 prophylaxis.