Expression and purification of inositol requiring enzyme 1 (IRE1)

Endoplasminen retikkeli (ER) on tärkeä organelli solulle, missä suuri määrä proteiineja syntetisoidaan ja muokataan lopulliseen toiminnalliseen muotoonsa. Tämän takia ER:in stressiä, joka johtuu väärin laskostuneiden proteiinien kerääntymisestä ER:iin, ei pidä ottaa kevyesti, koska se voi vaikuttaa moniin sairauksiin, kuten syöpään ja eri neurodegeneratiivisiin sairauksiin. Täten laskostumattomien proteiinienvaste (UPR) on mukautuva järjestelmä, joka auttaa ER:ia sopeutumaan lisääntyneeseen laskostumistarpeeseen. Yksi vasteen pääproteiineista on inositolia vaativa entsyymi 1 (IRE1). IRE1 havaitsee proteiinien laskostumisen tilan ER:issa ja käynnistää UPR-signalointireitin, jotta saavutetaan joko normaali laskostumistila tai solukuolema. Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli tuottaa hiivan IRE1 proteiinia E.colissa ja ihmisen IRE1 hyönteissoluissa, puhdistaa proteiini affiniteettikromatografialla ja tutkia sen kiderakennetta pienen molekyylimodulaattorin kanssa, joka voisi mahdollisesti tehostaa sen toimintaa. Proteiini tuotettiin onnistuneesti ja puhdistettiin glutationi-S-transferaasi (GST)-merkinnän avulla ja eristetyn proteiinin aktiivisuus määritettiin. Rakenteellisia tutkimuksia ei suoritettu, koska kiteytymiseen tarvittavaa absoluuttista puhtautta ja saantoa ei saavutettu johtuen proteiinin menetyksestä geelisuodatuksen aikana ja saostumisen takia. Tulosten perusteella on todennäköistä, että proteiinin rakenne voitaisiin ratkaista ja biokemialliset ja rakenteelliset tutkimukset F10:llä ovat erittäin mahdollisia.