Browsing by Author "Järvilehto, Julius"

Charcot-Marie-Tooth (CMT) on yhteinen nimitys perinnöllisille ääreishermosoluja vaurioittaville neuropatioille. Kyseessä on yksi yleisimmistä neurologisista perinnöllisistä sairauksista esiintyvyyden ollessa noin 1:2500. Monimutkaisten tautimekanismien ja riittämättömien hoitomuotojen vuoksi kyseinen tauti on mielenkiintoinen tutkimuksen kohde. Tutkimusryhmämme on selvittänyt CMT-taudin geenitaustaa Suomessa. Sairauden kliiniseen kuvaan kuuluu vaihtelevin vaikeusastein motosensoriset häiriöt, jotka lievimmillään rajoittuvat distaalisten lihasten heikkouteen. Kuitenkin vakavimmissa tapauksissa sairaus voi viedä potilaan liikuntakyvyn. Tällä hetkellä mitään spesifisiä hoitoja ei ole tarjolla, mutta alati lisääntyvän molekyylitason tiedon myötä muutamia lääkekandidaatteja on otettu kliinisiin kokeisiin. Hermosolujen välikokoista filamenttia koodaava geeni NEFL (neurofilament light) on yksi CMT-tautigeeneistä (CMT1F/2E muoto). Tässä tutkimuksessa pyrin luomaan tautimallin NEFL-proteiinin puutokselle. Muokkasin indusoituja pluripotentteja kantasoluja CRISPR-Cas9 - teknologialla NEFL-geenin poistamiseksi. Sen jälkeen erilaistin muokatut kantasolut alemmiksi motoneuroneiksi. Mallin avulla pyrin selvittämään, miten muiden välikokoisten filamenttien ja sairauteen liitettyjen geenien ilmentyminen muuttuu NEFL-poistogeenisissä neuroneissa. Sain erilaistettua kolme muokkaamaamme solulinjaa alemmiksi motoneuroneiksi. Täydellinen NEFL-proteiinin poisto oli tapahtunut kahdessa näistä linjoista. Käytin tutkimuksen analyyttisessä osassa avuksi RNA- ja proteiinitason tutkimusmenetelmiä (qPCR, Western Blot, immunosytokemia). Tuloksista selvisi, että periferiinin määrä oli noussut western blotissa, kun NEFL puuttuu soluissa. Lisäksi SLITRK2 ja LYNX1 mRNA määrä oli qPCR-analyysin mukaan vähentynyt ja GRM3 mRNA oli lisääntynyt muokatuissa soluissa. Näiden tulosten perusteella CMT2E-taudin patofysiologiaan liittynee muutoksia monissa erilaisissa solunsisäisissä kompensatorisissa mekanismeissa. (202 sanaa)